Cytokeratin 19CRISPR激活质粒(h): sc-400281-ACT

KRT19 编码细胞角蛋白 19（cytokeratin 19），这是一种 I 型中间丝蛋白，有助于维持单层上皮的结构完整性与机械韧性。细胞角蛋白 19 参与细胞骨架组织、细胞—细胞黏附动态以及上皮应激反应，其表达也常用于界定上皮谱系状态与分化程序。KRT19 表达模式的改变与上皮重塑、炎症性损伤反应以及肿瘤发生性转化有关，在这些过程中，中间丝组成的变化往往伴随增殖与迁移能力的转变。作为谱系与状态标志物，细胞角蛋白 19 常被用于研究与上皮可塑性、细胞骨架相关信号通路以及肿瘤异质性相关的机制。

Cytokeratin 19 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性KRT19的表达。

Cytokeratin 19 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的KRT19基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于KRT19转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Cytokeratin 19表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的KRT19位点，并能够研究内源性位点上依赖于Cytokeratin 19的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在KRT19表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Cytokeratin 19通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。