cytoglobin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402949

Panoramica

CYGB codifica la citoglobina, una globina esa-coordinata espressa in diversi tessuti, che lega ossigeno e ossido nitrico e contribuisce al mantenimento dell’equilibrio redox cellulare. La citoglobina è implicata nella protezione dallo stress ossidativo e nitrosativo, influenzando la segnalazione responsiva all’ipossia, la gestione delle specie reattive dell’ossigeno e il metabolismo dell’ossido nitrico. Attraverso questi processi, CYGB è stata collegata alla regolazione dell’attivazione dei fibroblasti, della funzione vascolare e dell’adattamento cellulare a microambienti poveri di ossigeno. Alterazioni dell’espressione di CYGB sono state riportate in contesti rilevanti per la biologia tumorale, lo stress infiammatorio e la fibrosi d’organo, a supporto del suo impiego come bersaglio meccanicistico in studi di vie di segnalazione e di fenotipi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO cytoglobin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CYGB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CYGB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CYGB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina cytoglobin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CYGB per lo studio della segnalazione di cytoglobin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CYGB critici per la funzione di cytoglobin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CYGB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal cytoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal cytoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CYGB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal cytoglobin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR cytoglobin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CYGB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CYGB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.