Plasmide Double Nickase (h) cytochrome c1: sc-404958-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cytochrome c1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cytochrome c1 Double Nickase (h) et le plasmide cytochrome c1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYC1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cytochrome c1 Antibody (A-5): sc-514435
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cytochrome c1 | sc-404958-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cytochrome c1 | sc-404958-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CYC1** code le **cytochrome c1**, une sous-unité essentielle du **complexe III mitochondrial** (complexe cytochrome **bc1**) qui transfère des électrons de l’**ubiquinol** vers le **cytochrome c** au sein de la membrane mitochondriale interne. Cette activité soutient la phosphorylation oxydative en contribuant à la translocation de protons, ce qui aide à établir le gradient électrochimique utilisé pour la synthèse d’ATP. La perturbation des composants du complexe III peut modifier l’équilibre rédox mitochondrial et la production d’espèces réactives de l’oxygène, reliant ainsi la biologie de CYC1 aux voies qui régulent le métabolisme énergétique cellulaire et les réponses au stress. La dérégulation de la respiration mitochondriale et l’intégrité de la chaîne de transport des électrons sont fréquemment étudiées dans le cadre du remodelage métabolique et des dysfonctionnements mitochondriaux associés aux maladies neurodégénératives.
cytochrome c1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYC1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.