Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c1 (m): sc-426027
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- cytochrome c1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique cytochrome c1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cytochrome c1 Antibody (A-5): sc-514435
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c1 (m) | sc-426027 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Cyc1* code le cytochrome c1, une sous-unité essentielle du complexe mitochondrial III (ubiquinol–cytochrome c réductase) qui assure le transfert d’électrons de l’ubiquinol vers le cytochrome c au sein de la membrane mitochondriale interne. Par son rôle dans le cycle Q, le cytochrome c1 contribue à la génération de la force proton-motrice qui alimente la synthèse d’ATP et participe au maintien de l’homéostasie rédox. La perturbation des composants du complexe III peut altérer la phosphorylation oxydative, augmenter les espèces réactives de l’oxygène (ROS) et entraîner des effets secondaires sur la signalisation de l’apoptose ainsi que sur les voies de contrôle qualité mitochondrial, telles que la mitophagie. *Cyc1* est donc largement étudié dans des modèles de dysfonctionnement mitochondrial et de stress métabolique, en lien avec des mécanismes impliqués dans les maladies neuromusculaires et neurodégénératives.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cytochrome c1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cyc1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cyc1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cyc1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cytochrome c1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cyc1 pour l'étude de la signalisation de cytochrome c1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cyc1 essentiels à la fonction de cytochrome c1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cyc1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le cytochrome c1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le cytochrome c1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cyc1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le cytochrome c1 plasmide HDR (m) et le cytochrome c1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cyc1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cyc1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.