Plasmide Double Nickase (m) cytochrome b5: sc-430951-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) cytochrome b5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cytochrome b5 Double Nickase (m) et le plasmide cytochrome b5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Cyb5a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) cytochrome b5 | sc-430951-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Cyb5a** code le cytochrome b5, une protéine à hème associée aux membranes qui transfère des électrons aux enzymes du cytochrome P450, aux désaturases d’acides gras et aux systèmes d’élongation dans le réticulum endoplasmique. Par ces interactions, le cytochrome b5 soutient le métabolisme oxydatif des xénobiotiques et des substrats endogènes, la biosynthèse des stéroïdes et des lipides, ainsi que l’homéostasie redox. L’activité de **Cyb5a** peut influencer les réponses cellulaires au stress oxydant et la prise en charge métabolique des médicaments et des hormones, le reliant à des voies pertinentes pour la fonction hépatique et l’équilibre lipidique systémique. Une altération du transfert d’électrons dépendant du cytochrome b5 a été associée à une dérégulation du métabolisme lipidique et à une perturbation des oxydations médiées par les P450, faisant de **Cyb5a** un point d’entrée utile pour des études mécanistiques dans des modèles métaboliques et toxicologiques.
cytochrome b5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cyb5a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cyb5a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cyb5a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cyb5a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.