CYTIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411299

Übersicht

CYTIP (cytohesin-1 interagierendes Protein) ist ein zytoplasmatisches Adapterprotein, das in Immunzellen besonders stark vertreten ist, die Inside-out-Signalgebung zu Integrinen moduliert und die Adhäsion, Polarisierung und Migration von Leukozyten unterstützt. Durch die Bindung an Cytohesin-1 kann CYTIP den ARF-GTPase-abhängigen Membrantransport und den Umbau des Aktinzytoskeletts beeinflussen und so rezeptorvermittelte Signale mit Veränderungen der Zellmotilität und der Organisation der immunologischen Synapse verknüpfen. CYTIP ist an Signalwegen beteiligt, die die T‑Zell-Aktivierung und die Funktion dendritischer Zellen steuern; eine veränderte Expression kann dabei die Rekrutierung von Immunzellen und Effektorantworten verschieben. Eine Fehlregulation CYTIP-assoziierter Signalgebung wurde im Kontext entzündlicher Prozesse und von Tumor–Immun-Interaktionen untersucht und ist damit relevant für die mechanistische Immunologie sowie die Forschung zur Tumormikroumgebung.

Das CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CYTIP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CYTIP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CYTIP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CYTIP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CYTIP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CYTIP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CYTIP-Exone abzielen, die für die CYTIP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CYTIP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CYTIP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CYTIP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CYTIP HDR-Plasmid (h) und CYTIP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CYTIP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CYTIP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.