Plasmide Double Nickase (h) cystatin SN: sc-405440-NIC

CST1 code la cystatine SN, une cystatine sécrétée de type 2 qui inhibe des protéases à cystéine de type papaïne telles que les cathepsines, modulant ainsi la protéolyse extracellulaire et péricellulaire. En limitant l’activité des cathepsines, la cystatine SN participe à la régulation de l’homéostasie de la barrière épithéliale, de la signalisation inflammatoire et du remodelage du microenvironnement tissulaire dépendant des protéases. Une expression altérée de CST1 a été rapportée dans plusieurs pathologies épithéliales et cancers, où un déséquilibre entre activité protéase–antiprotéase peut influencer des processus liés à l’invasion et aux interactions avec les cellules immunitaires. Par conséquent, CST1 est fréquemment étudié dans des voies reliant le contrôle de la protéolyse à la biologie des muqueuses, au remodelage associé aux tumeurs et aux réponses hôte–microbiote.

cystatin SN Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CST1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CST1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CST1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CST1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.