Plasmide CRISPR d'Activation (h) cystatin A: sc-416374-ACT

Le gène humain **CSTA** code la cystatine A, une cystatine intracellulaire de type I qui inhibe des protéases à cystéine de type papaïne telles que les cathepsines B, H et L, modulant ainsi la protéolyse, le traitement des antigènes et l’homéostasie cellulaire liée aux fonctions de barrière. En limitant l’activité des protéases lysosomales et cytosoliques, la cystatine A contribue à la régulation de la différenciation des kératinocytes, de l’intégrité épithéliale et des réponses au stress associées à l’équilibre protéase–antiprotéase. Une expression dérégulée de **CSTA** a été associée à des affections cutanées inflammatoires et au remodelage épithélial, et les altérations de la dynamique cystatine–cathepsine sont fréquemment étudiées dans le contexte de l’invasion tumorale, de la signalisation immunitaire et du renouvellement de la matrice extracellulaire. Ainsi, **CSTA** constitue un point d’entrée utile pour disséquer les voies contrôlées par les protéases qui influencent l’adhérence cellulaire, la migration et la mort cellulaire programmée.

cystatin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSTA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cystatin A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSTA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSTA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cystatin A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSTA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cystatin A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cystatin A dans les cellules tumorales présentant une expression de CSTA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.