Plasmide Double Nickase (h) Cyr61/CCN1: sc-400366-NIC

CYR61 (Cyr61/CCN1) code une protéine matricellulaire sécrétée de la famille CCN, qui intègre les signaux de la matrice extracellulaire avec ceux des récepteurs de surface cellulaire afin de réguler l'adhérence, la migration, la prolifération et la survie. Cyr61/CCN1 active des voies de signalisation dépendantes des intégrines et de l'héparane sulfate et module des voies en aval, notamment l'adhésion focale/FAK, MAPK/ERK et PI3K/AKT, reliant des entrées mécaniques et inflammatoires du microenvironnement à des programmes d'expression génique. Dans les tissus humains, une expression altérée de CYR61 est associée à l'angiogenèse, à la réparation des plaies, à la fibrose et aux interactions tumeur–stroma, ce qui en fait une cible pertinente pour l'étude du remodelage de la matrice extracellulaire et d'une signalisation dépendante du contexte. Ces caractéristiques soutiennent son utilisation comme nœud d'analyse de la communication cellule–matrice, des réponses endothéliales et des réseaux transcriptionnels induits par le stress.

Cyr61/CCN1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYR61 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYR61. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYR61. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYR61.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.