CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403383-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CYP8B1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CYP8B1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CYP8B1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CYP8B1: sc-101387
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403383-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP8B1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403383-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP8B1 kodiert die Sterol-12α-Hydroxylase, ein mikrosomales Cytochrom-P450-Enzym, das einen entscheidenden Hydroxylierungsschritt im klassischen Biosyntheseweg der Gallensäuren katalysiert und damit das Verhältnis von Cholsäure zu Chenodesoxycholsäure beeinflusst. Durch diese Aktivität trägt CYP8B1 zur Zusammensetzung des hepatischen Gallensäurepools bei und beeinflusst dadurch die enterohepatische Zirkulation, die Lipidresorption sowie die metabolische Signalübertragung über gallensäureresponsive nukleäre Rezeptoren und GPCR-Signalwege wie FXR und TGR5. Eine veränderte Expression oder Aktivität von CYP8B1 wurde mit einer dysregulierten Gallensäurezusammensetzung und weiter gefassten metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Leber- und kardiometabolische Forschung relevant sind. CYP8B1 ist daher ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zum hepatischen Stoffwechsel, zu Signalnetzwerken der Gallensäuren und zu Gen-Umwelt-Interaktionen in Hepatozyten und geeigneten Modellsystemen.
CYP8B1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CYP8B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CYP8B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CYP8B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CYP8B1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.