CYP4X1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-429886-LAC

Cyp4x1 codifica l’enzima del citocromo P450 CYP4X1, una monoossigenasi associata alla membrana coinvolta nel metabolismo degli acidi grassi e degli eicosanoidi, inclusa l’ossidazione di lipidi derivati dall’acido arachidonico che possono modulare la segnalazione infiammatoria e l’omeostasi vascolare o neuronale. Come parte della più ampia via ossidativa dei P450, l’attività di CYP4X1 influenza l’equilibrio redox cellulare e la disponibilità di mediatori lipidici, collegandola a processi quali le risposte allo stress ossidativo e la comunicazione intercellulare. Nei tessuti murini, l’espressione di Cyp4x1 è stata riportata in contesti arricchiti a livello cerebrale, a supporto della ricerca sulle reti di segnalazione lipidica rilevanti per la neuroinfiammazione e la regolazione neurovascolare. La regolazione alterata degli enzimi P450 che metabolizzano i lipidi viene spesso esaminata in modelli di disturbi metabolici e infiammatori, rendendo Cyp4x1 un nodo utile per studi meccanicistici focalizzati sulle vie.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP4X1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cyp4x1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CYP4X1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cyp4x1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CYP4X1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cyp4x1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.