Plasmide Double Nickase (h) CYP2E1: sc-401357-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CYP2E1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CYP2E1 Double Nickase (h) et le plasmide CYP2E1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CYP2E1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CYP2E1 | sc-401357-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CYP2E1 | sc-401357-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) est une monooxygénase microsomale qui oxyde de petits substrats organiques et contribue au métabolisme de phase I des xénobiotiques dans le réticulum endoplasmique. Il participe au cycle d’oxydo-réduction et peut générer des espèces réactives de l’oxygène, reliant l’activité de CYP2E1 au stress oxydatif, à la peroxydation lipidique et aux voies de signalisation inflammatoires en aval. CYP2E1 s’inscrit dans les voies hépatiques de détoxification et influence les réponses cellulaires à l’alcool et aux expositions chimiques via le métabolisme de multiples composés de faible poids moléculaire. Des modifications de l’expression ou de l’activité de CYP2E1 ont été associées à une susceptibilité aux lésions hépatiques induites par des toxiques et à des phénotypes de stress métabolique, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du traitement des xénobiotiques.
CYP2E1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP2E1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP2E1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP2E1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP2E1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.