CYP2A6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403448

概要

CYP2A6は、さまざまな外因性化合物および一部の内因性基質の酸化的代謝を触媒するヒトのシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしており、細胞の化学的恒常性と酸化還元（レドックス）バランスの維持に寄与します。小胞体に局在するヘムタンパク質として、CYP2A6は第I相薬物代謝経路で機能し、基質酸化時の電子伝達を担うNADPH–シトクロムP450還元酵素と協調して働きます。CYP2A6の発現量や活性の変動は代謝フラックスを変化させ、化学物質による毒性や発がん物質の活性化に対する感受性に影響し得るため、薬理ゲノム多様性や曝露関連疾患の機序研究において重要です。また、肝臓での高い発現や誘導性の制御は、転写制御、酵素の安定性、環境化学物質に対する適応応答の解析にも適しています。

CYP2A6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYP2A6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYP2A6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYP2A6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP2A6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP2A6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYP2A6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP2A6の機能に不可欠なCYP2A6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYP2A6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP2A6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCYP2A6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYP2A6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP2A6 HDRプラスミド（h）および CYP2A6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYP2A6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYP2A6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。