Particules Lentivirales d'Activation (h) CYP19: sc-400604-LAC

Le gène humain CYP19A1 code l’aromatase (CYP19), une enzyme du cytochrome P450 localisée dans le réticulum endoplasmique, qui catalyse l’étape terminale de la biosynthèse des œstrogènes en convertissant les androgènes en œstrogènes. En contrôlant la production locale et systémique d’estradiol, CYP19A1 module des réseaux de signalisation des hormones stéroïdiennes qui influencent la biologie de la reproduction, la fonction du tissu adipeux, l’homéostasie osseuse et la régulation neuroendocrinienne. Son activité s’intègre aux voies stéroïdogènes et à la régulation par rétrocontrôle le long de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique, façonnant des programmes transcriptionnels médiés par les récepteurs des œstrogènes. Une expression dérégulée de CYP19A1 ou une activité anormale de l’aromatase est impliquée dans des phénotypes hormono-dépendants et fait l’objet d’études fréquentes dans des contextes tels que la biologie des tumeurs mammaires et endométriales, le syndrome des ovaires polykystiques, ainsi que les syndromes d’excès ou de déficit en aromatase.

Les particules d'activation lentivirales CYP19 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CYP19A1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CYP19 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CYP19A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CYP19. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CYP19A1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.