Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP11B2: sc-405281-ACT

CYP11B2 code l’aldostérone synthase, une enzyme mitochondriale du cytochrome P450 qui catalyse les étapes terminales d’oxydation de la biosynthèse de l’aldostérone à partir de la désoxycorticostérone. Cette activité stéroïdogène intègre le métabolisme du cholestérol, le transfert rédox mitochondrial et la signalisation de la zone glomérulée de la surrénale, reliant l’homéostasie électrolytique à la régulation endocrine. L’expression de CYP11B2 est étroitement contrôlée par l’angiotensine II, le potassium et des voies dépendantes de l’AMPc, qui modulent les processus stéroïdogènes aigus de régulation ainsi que les programmes transcriptionnels. Une activité ou une expression dérégulée de CYP11B2 est associée à une production altérée de minéralocorticoïdes et fait l’objet d’études fréquentes dans le contexte de la stéroïdogenèse surrénalienne, de phénotypes endocriniens liés à l’hypertension et de modèles de recherche sur les néoplasies surrénaliennes.

CYP11B2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP11B2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP11B2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP11B2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP11B2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP11B2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP11B2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP11B2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP11B2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP11B2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.