Plasmide Double Nickase (h) CYP11B1: sc-403040-NIC

CYP11B1 code une enzyme mitochondriale de la famille des cytochromes P450 qui catalyse des étapes d’hydroxylation en 11β essentielles à la biosynthèse du cortisol et de la corticostérone dans le cortex surrénalien. Dans la voie de stéroïdogenèse, CYP11B1 agit en aval de la mobilisation du cholestérol et des systèmes mitochondriaux de transfert d’électrons, en intégrant le contrôle de la production de glucocorticoïdes régulé par l’ACTH. Une altération de l’activité de CYP11B1 perturbe l’homéostasie des glucocorticoïdes et les flux de stéroïdes surrénaliens, ce qui est pertinent pour des troubles caractérisés par une production anormale de cortisol et des modifications compensatoires des voies des minéralocorticoïdes et des androgènes. CYP11B1 est donc largement étudié dans des modèles cellulaires surrénaliens afin d’explorer la stéroïdogenèse, la catalyse des P450 mitochondriaux et la signalisation endocrinienne de la réponse au stress.

CYP11B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP11B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP11B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP11B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP11B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.