CYFIP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429445

Descripción general

Cyfip2 codifica CYFIP2, un efector citoplasmático que acopla la señalización de Rac1 con la remodelación del citoesqueleto de actina y el control de la traducción mediante interacciones con el complejo regulador WAVE y ensamblajes ribonucleoproteicos asociados a FMRP. En neuronas, CYFIP2 contribuye a la dinámica del cono de crecimiento, la maduración de las espinas dendríticas y la plasticidad sináptica al coordinar la polimerización de actina impulsada por Arp2/3 con la síntesis de proteínas dependiente de la actividad. Estos procesos sitúan a CYFIP2 en la interfaz entre la organización del citoesqueleto y el metabolismo del ARN, vinculándolo con vías que sustentan la conectividad neuronal y la función de las sinapsis excitadoras. La alteración de la actividad de CYFIP2 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con susceptibilidad relacionada con crisis epilépticas en estudios genéticos y funcionales, lo que respalda su relevancia para el modelado mecanístico en sistemas de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYFIP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cyfip2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cyfip2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cyfip2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYFIP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cyfip2 para la investigación de la señalización de CYFIP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cyfip2 críticos para la función de CYFIP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cyfip2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYFIP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CYFIP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cyfip2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYFIP2 (m) y el plásmido HDR CYFIP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cyfip2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cyfip2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.