Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cyclophilin 40 (m): sc-426720
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Cyclophilin 40 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Cyclophilin 40, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cyclophilin 40 Antibody (C-11): sc-137216
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cyclophilin 40 (m) | sc-426720 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Ppid code la cyclophiline 40 (Cyp40), une isomérase peptidyl‑prolyl cis–trans qui agit comme co‑chaperon à domaine TPR au sein des complexes HSP90/HSP70. En facilitant la maturation conformationnelle et l’assemblage des protéines clientes, Cyp40 influence la protéostasie, la signalisation des récepteurs stéroïdiens et des voies de réponse au stress liées au repliement des protéines et au contrôle qualité. Ppid a également été associé, via des mécanismes dépendants des chaperons, à la régulation de la prise en charge des protéines mitochondriales et de la sensibilité à l’apoptose. La dérégulation des réseaux chaperons–immunophilines est fréquemment étudiée dans des contextes de neurodégénérescence, d’inflammation et de stress du protéome associé au cancer, ce qui fait de Ppid un nœud utile pour des investigations mécanistiques dans des systèmes murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cyclophilin 40 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppid dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppid, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppid à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cyclophilin 40.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppid pour l'étude de la signalisation de Cyclophilin 40, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Ppid essentiels à la fonction de Cyclophilin 40
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppid pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Cyclophilin 40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cyclophilin 40 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppid. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Cyclophilin 40 plasmide HDR (m) et le Cyclophilin 40 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppid pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppid définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.