cyclin Y Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426856

Descripción general

El gen Ccny de ratón codifica la ciclina Y, una ciclina asociada a la membrana que coordina la señalización ligada al ciclo celular con programas de desarrollo y metabólicos. Se ha implicado a la ciclina Y en la regulación de la actividad de las CDK y en facilitar la modulación de la vía Wnt/β-catenina mediante el control de componentes de señalización en la membrana plasmática, lo que influye en la proliferación, la diferenciación y la homeostasis tisular. La expresión de Ccny y la dinámica de la señalización impulsada por ciclinas se estudian en contextos como el comportamiento de células madre/progenitoras, el desarrollo neuronal y la remodelación tisular, donde el control del ciclo celular alterado y la señalización Wnt son rasgos comunes. Como resultado, los modelos de pérdida de función de Ccny son útiles para desentrañar la regulación de puntos de control dependientes de ciclinas, la intercomunicación entre vías y fenotipos relevantes para la biología del cáncer y la investigación del neurodesarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO cyclin Y (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccny en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccny junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccny tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína cyclin Y.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccny para la investigación de la señalización de cyclin Y, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccny críticos para la función de cyclin Y
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccny para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido cyclin Y CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido cyclin Y CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccny. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR cyclin Y (m) y el plásmido HDR cyclin Y (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccny para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccny definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.