Plásmido Doble Nickase (h) cyclin T2a/b: sc-404586-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)cyclin T2a/b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa cyclin T2a/b (h) y el plásmido de doble nickasa cyclin T2a/b (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CCNT2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: cyclin T2a/b Anticuerpo (2128C1a): sc-81243
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) cyclin T2a/b | sc-404586-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) cyclin T2a/b | sc-404586-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNT2 codifica la ciclina T2 (isoformas T2a y T2b), una ciclina reguladora que se asocia con CDK9 para formar el complejo factor positivo de elongación de la transcripción b (P-TEFb). P-TEFb fosforila el dominio C-terminal de la ARN polimerasa II y los factores negativos de elongación, promoviendo una elongación transcripcional productiva y coordinando programas de expresión vinculados a la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. Mediante interacciones con reguladores transcripcionales y redes de control de la elongación, la ciclina T2 influye en la dinámica de la transcripción asociada a la cromatina en diversos conjuntos génicos. La desregulación de la señalización de P-TEFb y del control de la elongación se ha asociado con estados transcripcionales proliferativos e inmunitarios alterados, lo que convierte a CCNT2 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de fenotipos dependientes de la transcripción.
cyclin T2a/b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CCNT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CCNT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CCNT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CCNT2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.