Plasmide Double Nickase (h) cyclin G1: sc-402045-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) cyclin G1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide cyclin G1 Double Nickase (h) et le plasmide cyclin G1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCNG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: cyclin G1 Antibody (F-5): sc-8016
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) cyclin G1 | sc-402045-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) cyclin G1 | sc-402045-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNG1 code la cycline G1, une cycline atypique dont la transcription est régulée par p53 et qui coordonne le contrôle du cycle cellulaire avec les réponses cellulaires au stress. La cycline G1 participe à la régulation des points de contrôle (checkpoints) et à la modulation des réseaux de phosphorylation des protéines, notamment via des interactions influençant la boucle de rétroaction MDM2–p53 et des voies de signalisation associées aux phosphatases, telles que des complexes liés à PP2A. Par ces mécanismes, CCNG1 influe sur la prolifération, la stabilité génomique et les réponses aux dommages de l’ADN, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie tumorale, de la résistance au stress génotoxique et des dérégulations du cycle cellulaire dans des contextes pathologiques humains. Une expression ou une régulation altérée de CCNG1 a été observée dans de nombreux types de cancers, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour disséquer les voies de signalisation d’adaptation au stress.
cyclin G1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCNG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCNG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCNG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCNG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.