Plasmide CRISPR d'Activation (h) CXXC5: sc-403248-ACT

La protéine humaine CXXC5 (CXXC-type zinc finger protein 5) est un régulateur nucléaire qui se lie à l’ADN riche en CpG et module des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Elle est surtout connue comme composant de rétrocontrôle négatif, dépendant du contexte, de la voie de signalisation Wnt/β-caténine via son interaction avec Dishevelled, influençant ainsi la prolifération et la différenciation. CXXC5 a également été impliquée dans la régulation épigénétique et les voies sensibles au stress, contribuant au contrôle du développement hématopoïétique et neural. Une expression dérégulée de CXXC5 ou une intégration anormale de ses signaux a été associée à des états de différenciation altérés et à des phénotypes prolifératifs observés dans des contextes de recherche sur le cancer et les maladies du développement.

CXXC5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CXXC5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CXXC5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CXXC5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CXXC5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CXXC5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CXXC5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CXXC5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CXXC5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CXXC5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.