Particules Lentivirales d'Activation (h) CXCR-4: sc-400254-LAC

Le gène humain CXCR4 code CXCR-4, un récepteur de chimiokines à sept domaines transmembranaires qui se lie à CXCL12/SDF-1 afin de coordonner la chimiotaxie, la rétention cellulaire et l’adhésion dans les compartiments hématopoïétiques et immunitaires. La signalisation de CXCR4 active des voies couplées aux protéines G, notamment PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCβ–flux de Ca²⁺, ainsi qu’un trafic du récepteur dépendant de la β-arrestine, modulant la migration, la survie et la dynamique du cytosquelette. Une activité dérégulée de CXCR4 est impliquée dans un homing leucocytaire anormal et une signalisation inflammatoire, et est fréquemment étudiée dans le contexte de l’invasion des cellules tumorales, des interactions avec la niche métastatique et du dialogue avec le microenvironnement. En tant que récepteur de surface intégrant des gradients de chimiokines, CXCR-4 est largement utilisé comme nœud fonctionnel pour explorer des tests de migration, l’internalisation du récepteur et les programmes transcriptionnels en aval.

Les particules d'activation lentivirales CXCR-4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CXCR4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CXCR-4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CXCR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CXCR-4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CXCR4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.