Plásmido Doble Nickase (h) CXCR-4: sc-400254-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CXCR-4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CXCR-4 (h) y el plásmido de doble nickasa CXCR-4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CXCR4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CXCR-4 Anticuerpo (4G10): sc-53534
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CXCR-4 | sc-400254-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CXCR-4 | sc-400254-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXCR4 codifica el receptor de quimiocinas CXCR-4, un GPCR de siete dominios transmembrana que se une a CXCL12/SDF-1 para regular la quimiotaxis, la adhesión celular y las señales de supervivencia. La actividad de CXCR-4 se acopla a vías mediadas por proteínas G y por β-arrestina, activando cascadas aguas abajo como PI3K/AKT, MAPK/ERK y el flujo de calcio mediado por PLC para coordinar la remodelación del citoesqueleto y la migración direccional. Este eje es central para el tráfico de leucocitos y la retención de células hematopoyéticas en los nichos de la médula ósea, y se investiga con frecuencia en estudios sobre la dinámica de células inmunes y la diseminación de células tumorales. La desregulación de la señalización y la expresión de CXCR4 se asocia con respuestas inflamatorias alteradas y con fenotipos de invasión y metástasis relacionados con el cáncer, lo que lo convierte en una diana habitual para el análisis mecanístico de vías.
CXCR-4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CXCR4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CXCR4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CXCR4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CXCR4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.