Plasmide CRISPR d'Activation (h) CUL-5: sc-401344-ACT

Le gène humain **CUL5** code la culline-5 (CUL-5), un composant échafaudage des complexes ligases E3 à ubiquitine de type culline-RING, qui favorisent la polyubiquitination et la dégradation protéasomale de substrats spécifiques. Par son assemblage avec l’élongine B/C et des protéines adaptatrices à motif SOCS-box, CUL-5 régule l’homéostasie protéique, l’amplitude de la transduction du signal, ainsi que les programmes de cycle cellulaire et de réponse au stress, en contrôlant la stabilité d’intermédiaires de signalisation. La signalisation ubiquitine dépendante de CUL-5 recoupe des voies gouvernant les réponses aux cytokines et aux facteurs de croissance, influençant ainsi la prolifération, la différenciation et la régulation de l’immunité innée. Une expression dérégulée de CUL5 ou une activité modifiée du complexe CRL5 a été impliquée dans la biologie des cancers et d’autres troubles liés à une protéostasie aberrante médiée par l’ubiquitine.

CUL-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CUL5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CUL-5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CUL5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CUL5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CUL-5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CUL5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CUL-5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CUL-5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CUL5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.