Plasmide Double Nickase (h) CUL-1: sc-400972-NIC

Le gène humain **CUL1** code la culline-1 (CUL-1), une protéine échafaudage centrale des complexes ligases E3 de l’ubiquitine de type **SCF** (SKP1–CUL1–F-box), qui catalysent l’ubiquitination et la dégradation protéasomale de substrats phosphorylés. Grâce à son assemblage régulé avec SKP1, RBX1 et divers adaptateurs F-box, CUL-1 contrôle les transitions du cycle cellulaire, l’octroi de licence de réplication de l’ADN et la transduction des signaux en orientant la dégradation de régulateurs clés tels que les cyclines, les inhibiteurs de CDK et des facteurs de transcription spécifiques de certaines voies. L’activité de CUL-1 est modulée par la dynamique de neddylation/déneddylation et relie la protéostasie dépendante de l’ubiquitine au contrôle des points de contrôle et aux réponses au stress. La dérégulation du renouvellement des substrats médié par SCF–CUL1 a été associée, dans des contextes cellulaires pertinents pour la maladie, à une signalisation oncogénique, à l’instabilité génomique et à des altérations de la signalisation inflammatoire ou métabolique.

CUL-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CUL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CUL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CUL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CUL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.