Plasmide CRISPR d'Activation (h) CUL-1: sc-400972-ACT

Le gène humain **CUL1** code la culline-1 (CUL-1), un échafaudage central des complexes de ligase E3 ubiquitine **SCF** (SKP1–CUL1–F-box) qui coordonnent la reconnaissance des substrats et le transfert d’ubiquitine afin de réguler leur dégradation par le protéasome. En contrôlant la stabilité de régulateurs clés du cycle cellulaire et de la signalisation, tels que les cyclines, les inhibiteurs de CDK, ainsi que des composants des voies **NF-κB** et **Wnt**, CUL-1 contribue au maintien d’une progression ordonnée lors de la transition **G1/S** et des programmes transcriptionnels dépendants des signaux. L’activité de CUL-1 est modulée par des cycles de neddylation/déneddylation, ce qui la relie à une régulation dynamique de la protéostasie médiée par l’ubiquitine. La dérégulation de l’ubiquitination dépendante de SCF/CUL1 a été associée à une prolifération aberrante, une instabilité génomique et une signalisation inflammatoire altérée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie.

CUL-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CUL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CUL-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CUL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CUL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CUL-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CUL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CUL-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CUL-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CUL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.