Plásmido CRISPR de Activación (h) CTPS1: sc-403505-ACT

CTPS1 (CTP sintasa 1) es una enzima limitante de la velocidad en la biosíntesis de novo de nucleótidos de citidina que cataliza la conversión de UTP en CTP dependiente de ATP, acoplando la actividad de amidotransferasa de glutamina al metabolismo de las pirimidinas. Al controlar los reservorios intracelulares de CTP, CTPS1 sustenta la síntesis de ADN/ARN, la producción de fosfolípidos y programas metabólicos ligados a la proliferación, con una estrecha integración en la homeostasis de nucleótidos y la progresión del ciclo celular. La regulación alterada de la biosíntesis de pirimidinas, incluida la actividad de CTPS1 y su ensamblaje en filamentos de citoofidias, puede influir en las respuestas al estrés de replicación y en la capacidad de crecimiento celular. El metabolismo desregulado de nucleótidos se estudia con frecuencia en contextos de transformación maligna y activación de células inmunitarias, lo que convierte a CTPS1 en una diana relevante para investigar dependencias metabólicas y el control transcripcional de la proliferación.

CTPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CTPS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTPS1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CTPS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CTPS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTPS1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CTPS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTPS1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTPS1 en células tumorales con expresión de CTPS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.