Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (h): sc-417472

Présentation

SLC25A1 code la protéine mitochondriale de transport du citrate (CTP), un transporteur de la membrane interne qui échange le citrate/isocitrate contre le malate et relie le métabolisme mitochondrial aux programmes biosynthétiques cytosoliques. En exportant le citrate pour la production d’acétyl-CoA dépendante de l’ATP-citrate lyase, CTP soutient la synthèse de novo des lipides, l’acétylation des protéines et la régulation épigénétique, tout en influençant également l’équilibre rédox via des voies en aval générant du NADPH. L’activité de SLC25A1 s’intègre au métabolisme central du carbone, notamment le cycle de l’acide citrique (cycle TCA), la glycolyse et les flux anaplérotiques, façonnant les réponses cellulaires à la disponibilité en nutriments et au stress mitochondrial. Un dérèglement du transport du citrate a été associé à un remodelage métabolique altéré observé dans le cancer, les troubles du neurodéveloppement et des contextes de signalisation inflammatoire, faisant de SLC25A1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques des interactions mitochondrie–cytosol.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A1 pour l'étude de la signalisation de CTP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A1 essentiels à la fonction de CTP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CTP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTP plasmide HDR (h) et le CTP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.