Plasmide CRISPR d'Activation (h) CTNNBL1: sc-409293-ACT

CTNNBL1 (caténine bêta‑like 1) code une protéine nucléaire à répétitions armadillo qui s’associe à des composants du spliceosome et a été impliquée dans la régulation du traitement du pré‑ARNm ainsi que des réseaux de protéines liant l’ARN. Des études fonctionnelles relient CTNNBL1 à la coordination de programmes d’expression génique qui influencent la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et le maintien de l’organisation nucléaire. Des perturbations de l’expression de CTNNBL1 ont été observées dans des jeux de données transcriptomiques sur le cancer ainsi que dans des études génétiques de phénotypes liés à l’immunité, ce qui étaye sa pertinence dans le couplage dérégulé entre transcription et épissage. CTNNBL1 présente donc un intérêt pour analyser comment des complexes protéiques nucléaires modulent la maturation des ARN et les voies de signalisation en aval dans les cellules humaines.

CTNNBL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTNNBL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CTNNBL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTNNBL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTNNBL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CTNNBL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTNNBL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CTNNBL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CTNNBL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CTNNBL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.