CTMP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429205

Descripción general

Them4 codifica CTMP (proteína moduladora del extremo carboxilo), un regulador asociado a la membrana, conocido sobre todo por modular la señalización de AKT/PKB. CTMP puede unirse a AKT e influir en su estado de fosforilación, lo que vincula a Them4 con el control, a través de la vía PI3K–AKT, de la supervivencia celular, el metabolismo y las respuestas al estrés. En sistemas de ratón, la alteración de la actividad de CTMP se ha asociado con cambios en la función mitocondrial, el manejo del estrés oxidativo y procesos relacionados con la apoptosis. Dado que la señalización PI3K–AKT está ampliamente implicada en fenotipos inflamatorios, metabólicos y neurodegenerativos, Them4 se estudia con frecuencia como un nodo que conecta la dinámica de señalización con estados celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CTMP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Them4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Them4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Them4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CTMP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Them4 para la investigación de la señalización de CTMP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Them4 críticos para la función de CTMP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Them4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CTMP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CTMP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Them4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CTMP (m) y el plásmido HDR CTMP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Them4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Them4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.