Particules Lentivirales d'Activation (h) CTLA-4: sc-400948-LAC

CTLA4 code pour CTLA-4, un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire exprimé principalement à la surface des lymphocytes T activés et des lymphocytes T régulateurs, qui limite l’amorçage des lymphocytes T en entrant en compétition avec CD28 pour les ligands CD80/CD86 sur les cellules présentatrices d’antigène. En atténuant les signaux proximaux issus du TCR et de la costimulation via CD28, CTLA-4 influence l’activité des voies PI3K–AKT et NF-κB en aval, la production de cytokines et le maintien de la tolérance périphérique. Des altérations de l’expression ou de la fonction de CTLA-4 ont été associées à des phénotypes de dysrégulation immunitaire, notamment l’auto-immunité et une perturbation de l’homéostasie immune, ce qui en fait un nœud clé pour étudier les seuils d’activation des lymphocytes T et la biologie des lymphocytes T régulateurs. CTLA-4 est également pertinent en immunologie des tumeurs, où les voies de checkpoint modèlent les réponses immunitaires antitumorales et les mécanismes d’échappement immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales CTLA-4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CTLA4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CTLA-4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CTLA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CTLA-4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CTLA4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.