Plasmide CRISPR d'Activation (h) CTLA-4: sc-400948-ACT

Le gène humain **CTLA4** code **CTLA-4 (CD152)**, un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire principalement exprimé sur les lymphocytes T activés et les lymphocytes T régulateurs, qui freine l’activation des lymphocytes T en entrant en compétition avec **CD28** pour la liaison à **CD80/CD86** sur les cellules présentatrices d’antigène. En atténuant le signal de co‑stimulation, CTLA-4 module des voies en aval, notamment **PI3K–AKT**, **NF‑κB** et **MAPK**, contribuant ainsi au maintien de la tolérance périphérique et à la limitation d’une production excessive de cytokines. Une expression ou une signalisation dérégulée de CTLA-4 est associée à une rupture de l’homéostasie immunitaire et à des réponses lymphocytaires altérées, impliquées dans des phénotypes auto-immuns et inflammatoires. En tant que nœud clé des circuits d’immunorégulation, **CTLA4** est largement étudié dans les états fonctionnels des lymphocytes T, la dynamique d’activation induite par l’antigène et les mécanismes de suppression immunitaire.

CTLA-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTLA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CTLA-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTLA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTLA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CTLA-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTLA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CTLA-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CTLA-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CTLA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.