Plásmido Doble Nickase (h) CtIP: sc-401292-NIC

RBBP8 codifica CtIP, un factor conservado de resección de extremos de ADN que coordina el inicio de la recombinación homóloga al promover el procesamiento 5′–3′ de las roturas de doble cadena y facilitar la carga de RAD51. CtIP actúa en la interfaz entre la señalización del daño en el ADN y el control del ciclo celular, integrándose con vías dependientes de BRCA1 y del complejo MRN para regular la activación de puntos de control, la estabilidad de la horquilla de replicación y la elección de la vía de reparación entre la recombinación homóloga y la unión alternativa de extremos. Debido a su función en el mantenimiento de la integridad del genoma, la alteración de la actividad de CtIP se asocia con inestabilidad cromosómica y se ha investigado en el contexto de la biología del cáncer y las redes de supresores tumorales. La resección dependiente de CtIP también influye en la recombinación de cambio de clase y otros procesos programados de rotura del ADN, lo que convierte a RBBP8 en un nodo clave para estudiar la fidelidad de la reparación y la mutagénesis.

CtIP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RBBP8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RBBP8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RBBP8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RBBP8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.