Particules Lentivirales d'Activation (m) CTH: sc-430767-LAC

Le gène murin **Cth** code la cystathionine γ-lyase (CTH), une enzyme clé de la voie de transsulfuration qui convertit la cystathionine en cystéine, ammoniac et α-cétobutyrate, reliant le métabolisme de la méthionine à l’homéostasie cellulaire des thiols. En contrôlant la disponibilité de la cystéine et en contribuant à la production endogène de sulfure d’hydrogène (H2S), CTH influence le tamponnement rédox, la synthèse du glutathion, la fonction mitochondriale et la signalisation de réponse au stress. L’activité de CTH s’inscrit à l’interface des voies du stress oxydatif et de la régulation inflammatoire, avec une pertinence rapportée pour la dérégulation métabolique, la biologie vasculaire et la neurobiologie dans des modèles de maladie. La modulation de l’expression de **Cth** est donc utile pour disséquer les flux d’acides aminés soufrés, la sensibilité aux ROS et les mécanismes de signalisation dépendants du H2S dans les cellules de mammifères.

Les particules d'activation lentivirales CTH (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cth dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CTH (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cth, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CTH. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cth ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.