Plásmido CRISPR de Activación (m) CTH: sc-430767-ACT

El gen **Cth** de ratón codifica la **cistationina gamma-liasa (CTH)**, una enzima dependiente de fosfato de piridoxal de la vía de **transulfuración** que convierte la cistationina en **cisteína**, **α-cetobutirato** y **amoníaco**, y contribuye a la producción celular de **sulfuro de hidrógeno (H₂S)**. Mediante la regulación de la disponibilidad de cisteína y del amortiguamiento redox, CTH influye en el metabolismo del **glutatión**, las respuestas al **estrés oxidativo**, la función mitocondrial y la homeostasis metabólica. Las alteraciones en la actividad de CTH se han vinculado con perturbaciones en el metabolismo de los aminoácidos azufrados y con la señalización dependiente de H₂S, que converge con vías inflamatorias, la biología vascular y la neurobiología. Como resultado, CTH se estudia con frecuencia en modelos de estrés oxidativo, disfunción metabólica y lesión tisular para esclarecer cómo el flujo de azufre modula el estado celular y las redes de señalización.

CTH El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cth sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CTH El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cth en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cth, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CTH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cth y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CTH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CTH en células tumorales con expresión de Cth silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.