Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTDSPL2 (m): sc-435953

Présentation

Ctdspl2 code pour CTDSPL2, une petite protéine de type phosphatase du domaine C‑terminal, impliquée dans la régulation de la signalisation dépendante de la phosphorylation et des programmes transcriptionnels. Les membres de cette famille de phosphatases sont associés au contrôle de la dynamique de déphosphorylation du CTD de l’ARN polymérase II, ainsi qu’à des circuits plus larges de régulation par phosphorylation qui influencent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien de l’identité cellulaire. Dans les systèmes murins, CTDSPL2 sert de point d’entrée mécanistique pour étudier comment des commutateurs médiés par des phosphatases s’intègrent au contrôle transcriptionnel et aux processus associés à la chromatine. Une régulation altérée des phosphatases du CTD et de nœuds de signalisation connexes est pertinente dans des modèles de prolifération aberrante et de dérégulation des lignages, ce qui motive leur étude dans des contextes de recherche en oncologie et en biologie du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTDSPL2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ctdspl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ctdspl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ctdspl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTDSPL2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ctdspl2 pour l'étude de la signalisation de CTDSPL2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ctdspl2 essentiels à la fonction de CTDSPL2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ctdspl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTDSPL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CTDSPL2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ctdspl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTDSPL2 plasmide HDR (m) et le CTDSPL2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ctdspl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ctdspl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.