CTDSPL2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435953

Panoramica

Ctdspl2 codifica CTDSPL2, una piccola proteina simil-fosfatasi del dominio C-terminale, implicata nella regolazione della segnalazione dipendente dalla fosforilazione e dei programmi trascrizionali. I membri di questa famiglia di fosfatasi sono associati al controllo della dinamica di defosforilazione del CTD della RNA polimerasi II e a circuiti fosfo-regolatori più ampi che influenzano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e il mantenimento dell’identità cellulare. Nei sistemi murini, CTDSPL2 viene utilizzata come punto di accesso meccanicistico per studiare come gli switch mediati da fosfatasi si integrino con il controllo trascrizionale e con processi associati alla cromatina. Un’alterata regolazione delle fosfatasi del CTD e di nodi di segnalazione correlati è rilevante in modelli di proliferazione aberrante e di disregolazione del destino di linea, a supporto di studi in ambito oncologico e dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CTDSPL2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ctdspl2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ctdspl2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ctdspl2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CTDSPL2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ctdspl2 per lo studio della segnalazione di CTDSPL2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ctdspl2 critici per la funzione di CTDSPL2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ctdspl2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CTDSPL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CTDSPL2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ctdspl2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CTDSPL2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CTDSPL2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ctdspl2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ctdspl2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.