Particules Lentivirales d'Activation (h2) CtBP2: sc-401865-LAC-2

Le gène humain CTBP2 code la protéine « C-terminal binding protein 2 » (CtBP2), un corégulateur transcriptionnel sensible au NADH qui agit principalement comme corépresseur en s’associant à des facteurs de transcription spécifiques de séquence et à des enzymes de modification de la chromatine afin de réguler des programmes d’expression génique. CtBP2 fait le lien entre l’état métabolique et le contrôle épigénétique via le recrutement d’histone désacétylases et d’autres complexes de remodelage, influençant des processus tels que la transition épithélio-mésenchymateuse, la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la transcription associée aux synapses neuronales (y compris des fonctions liées à l’isoforme CtBP2/RIBEYE). La dérégulation des réseaux transcriptionnels dépendants de CTBP2 a été associée à la progression tumorale et à la biologie des métastases, ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux et du système sensoriel, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques. L’édition génomique de CTBP2 permet l’exploration fonctionnelle des circuits de répression transcriptionnelle, la cartographie des dépendances d’interactions protéine–protéine et l’analyse d’effets de régulation génique spécifiques de certaines voies dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales CtBP2 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CTBP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CtBP2 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CTBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CtBP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CTBP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.