CtBP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-401865-ACT-2

O CTBP2 humano codifica a proteína de ligação ao terminal C 2 (CtBP2), um correpressor transcricional sensível ao NADH que modula a expressão gênica ao se associar a fatores de ligação ao DNA e recrutar complexos modificadores de cromatina. A CtBP2 regula programas ligados à determinação do destino celular, à transição epitélio–mesênquima, ao controle do ciclo celular e à apoptose, integrando o estado metabólico às respostas transcricionais em vias de desenvolvimento e de resposta ao estresse. A atividade desregulada de CTBP2 tem sido associada à alteração de redes transcricionais oncogênicas e à diferenciação aberrante em múltiplos contextos de câncer, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de progressão tumoral e metástase. A edição gênica de CTBP2 permite a investigação funcional da regulação de cromatina dependente de correpressores, o mapeamento de circuitos transcricionais e a validação de dependências de vias por meio de ensaios com repórteres, leituras ômicas e triagens de perturbação.

CtBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CtBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CtBP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CtBP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CtBP2 em células tumorais com expressão de CTBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.