Plasmide CRISPR/Cas9 KO CTAGE5 (h): sc-406164

Présentation

CTAGE5 (également connu sous le nom de MIA2) code un composant associé à la membrane de la machinerie d’export du RE, qui soutient le trafic dépendant de COPII et l’organisation des sites de sortie du RE. En coordonnant le chargement des cargos et la formation des vésicules, CTAGE5 contribue à une sécrétion efficace et au maintien de la protéostasie du RE, des processus étroitement liés à la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et aux voies de signalisation du stress du RE. La perturbation de la fonction de CTAGE5 peut modifier le flux de la voie sécrétoire, affecter la gestion intracellulaire des protéines et remodeler les réponses cellulaires au stress métabolique ou inflammatoire. En biologie humaine, ces voies sont fréquemment étudiées dans des contextes où la capacité sécrétoire et l’homéostasie du RE influencent des phénotypes pertinents pour les maladies, notamment l’adaptation des cellules tumorales et la signalisation liée au système immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CTAGE5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MIA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MIA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MIA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CTAGE5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MIA2 pour l'étude de la signalisation de CTAGE5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MIA2 essentiels à la fonction de CTAGE5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MIA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CTAGE5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CTAGE5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MIA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CTAGE5 plasmide HDR (h) et le CTAGE5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MIA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MIA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.