CstF-64T CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406358

Übersicht

CSTF2T kodiert CstF-64T, eine RNA-bindende Untereinheit des Cleavage Stimulation Factor (CstF)-Komplexes, der die 3′-End-Prozessierung und Polyadenylierung von prä-mRNAs steuert. Durch die Beeinflussung der Wahl der Spaltstelle und der alternativen Polyadenylierung trägt CstF-64T zur Vielfalt von Transkript-Isoformen, zur mRNA-Stabilität und zur Kontrolle der Translation bei, mit nachgelagerten Effekten auf Zellzustand und Differenzierungsprogramme. Seine Aktivität ist besonders in Keimbahn-Kontexten relevant sowie in Modellen, in denen Verschiebungen der 3′-UTR-Länge die posttranskriptionelle Regulation umgestalten. Eine Dysregulation der Spaltungs- und Polyadenylierungsmaschinerie, einschließlich CSTF2T-assoziierter Signalwege, steht mit weitreichenden Veränderungen der Genexpression in Zusammenhang, wie sie bei proliferativen und stressadaptiven Phänotypen in der Krebs- und Entwicklungsbiologie untersucht werden.

Das CstF-64T CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CSTF2T-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CSTF2T-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CSTF2T nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CstF-64T-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CSTF2T-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CstF-64T-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CSTF2T-Exone abzielen, die für die CstF-64T-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CSTF2T-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CstF-64T CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CstF-64T CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CSTF2T-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CstF-64T HDR-Plasmid (h) und CstF-64T HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CSTF2T-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CSTF2T-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.