Plasmide Double Nickase (h) CstF-64: sc-402202-NIC

CSTF2 code pour la sous-unité de 64 kDa du facteur de stimulation du clivage (CstF-64), un composant essentiel de la machinerie de maturation de l’extrémité 3′ des pré-ARNm doté d’une activité de liaison à l’ARN. CstF-64 reconnaît des éléments de séquence en aval riches en GU et coopère avec CPSF et d’autres facteurs pour favoriser le clivage endonucléolytique et la polyadénylation, influençant ainsi la stabilité des transcrits, leur traduction et les programmes d’expression génique. En modulant le choix des sites de polyadénylation alternative, CSTF2 contribue à réguler la longueur des 3′ UTR et le contrôle post-transcriptionnel dans des contextes prolifératifs et de réponse au stress. Une maturation dysrégulée de l’extrémité 3′ et la polyadénylation alternative sont fréquemment associées à des signatures d’expression génique oncogéniques et à d’autres altérations du transcriptome pertinentes pour les maladies, faisant de CSTF2 une cible précieuse pour des études mécanistiques de la maturation de l’ARN.

CstF-64 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSTF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSTF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSTF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSTF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.