Plásmido Doble Nickase (h) CSN8: sc-409800-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CSN8 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CSN8 (h) y el plásmido de doble nickasa CSN8 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a COPS8. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CSN8 Anticuerpo (F-8): sc-393482
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CSN8 | sc-409800-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CSN8 | sc-409800-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COPS8 codifica CSN8, un componente central del signalosoma COP9 (CSN) que regula las ligasas de ubiquitina E3 tipo cullin-RING mediante el control de la dinámica de neddilación/desneddilación de las cullinas. Al modular la proteostasis dependiente de ubiquitina, CSN8 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y las vías de transducción de señales que dependen del recambio oportuno de proteínas reguladoras clave. La función de CSN8 se relaciona con la actividad del sistema ubiquitina–proteasoma y con programas de adaptación al estrés como la autofagia, configurando la homeostasis celular tanto en estados proliferativos como diferenciados. La desregulación de subunidades del signalosoma COP9, incluyendo cambios en la expresión de COPS8 o alteraciones de la integridad del CSN, se ha asociado con un control anómalo del crecimiento y con cambios relevantes para enfermedad en la estabilidad del proteoma en células humanas.
CSN8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus COPS8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de COPS8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de COPS8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con COPS8 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.