Plasmide Double Nickase (h) CSB: sc-401287-NIC

ERCC6 code la protéine humaine B du syndrome de Cockayne (CSB), un facteur de type hélicase de l’ADN, dépendant de l’ATP, appartenant à la famille SWI2/SNF2, qui couple la transcription à la réparation par excision de nucléotides. CSB est au cœur de la NER couplée à la transcription (TC-NER) : elle détecte les lésions qui bloquent l’ARN polymérase II, coordonne le remodelage de la chromatine et recrute la machinerie de réparation afin de rétablir l’élongation transcriptionnelle. Au-delà de la TC-NER, CSB contribue à la stabilité du génome via des rôles dans les réponses aux dommages oxydatifs de l’ADN, la gestion du stress réplicatif et l’homéostasie mitochondriale. L’altération de la fonction d’ERCC6 est associée au syndrome de Cockayne et à des phénotypes neurodéveloppementaux et progéroïdes apparentés, faisant de CSB un nœud clé pour l’étude de la signalisation des dommages à l’ADN et des défauts de réparation liés à la transcription.

CSB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERCC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERCC6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERCC6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERCC6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.