CSA Plasmide Double Nickase (h): sc-403428-NIC

ERCC8 codifica la proteina umana CSA, un fattore con ripetizioni WD40 che, insieme a DDB1, CUL4A e RBX1, forma il complesso ligasi E3 dell’ubiquitina CRL4^CSA, coordinando la riparazione per escissione di nucleotidi accoppiata alla trascrizione (TC-NER). CSA contribuisce a risolvere le lesioni che bloccano l’RNA polimerasi II reclutando attività di riparazione e rimodellamento della cromatina e promuovendo il turnover, dipendente dall’ubiquitina, dei componenti della risposta al danno. Attraverso queste funzioni, CSA sostiene la stabilità del genoma, il recupero della trascrizione dopo danni indotti dai raggi UV e il mantenimento dell’omeostasi cellulare in condizioni di stress genotossico. L’alterazione patogena di ERCC8 è associata alla sindrome di Cockayne gruppo A, un disordine della riparazione del DNA utilizzato come modello per studiare difetti della TC-NER, stress trascrizionale e vulnerabilità del neurosviluppo.

CSA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERCC8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERCC8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERCC8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERCC8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.