cryptdin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419984
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- cryptdin 3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico cryptdin 3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
cryptdin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419984 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Defa3 codifica a criptidina 3, uma α-defensina derivada de células de Paneth que contribui para a defesa imune inata no intestino delgado de camundongos ao atingir diretamente as membranas microbianas e moldar a composição da microbiota intestinal. Como componente da biologia dos peptídeos antimicrobianos, a criptidina 3 participa da manutenção da barreira epitelial e da homeostase imune da mucosa, em conjunto com vias de reconhecimento de padrões e de sinalização inflamatória. Alterações na produção de defensinas por células de Paneth têm sido associadas à disbiose e à inflamação intestinal, tornando o Defa3 relevante para estudos mecanísticos das interações hospedeiro–microrganismo. A perturbação de Defa3 também é útil para examinar como peptídeos antimicrobianos influenciam a resistência à colonização bacteriana e as respostas do epitélio ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO cryptdin 3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Defa3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Defa3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Defa3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína cryptdin 3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Defa3 para a investigação da sinalização de cryptdin 3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Defa3 críticos para a função cryptdin 3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Defa3 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo cryptdin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo cryptdin 3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Defa3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo cryptdin 3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR cryptdin 3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Defa3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Defa3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.