Plasmide CRISPR/Cas9 KO cryptdin 25 (m): sc-419983

Présentation

Defa25 code la cryptdine 25, une α-défensine dérivée des cellules de Paneth chez la souris, qui contribue à l’immunité innée des surfaces muqueuses en exerçant une large activité antimicrobienne dans la lumière intestinale. En tant que peptide cationique sécrété, la cryptdine 25 aide à façonner les interactions hôte–microbiote et soutient l’homéostasie de la barrière épithéliale, reliant les fonctions effectrices antimicrobiennes aux signaux inflammatoires et aux voies de détection des microbes. Une expression altérée des défensines et un dysfonctionnement des cellules de Paneth sont fréquemment étudiés dans le contexte de la dysbiose intestinale et d’états inflammatoires chroniques, où les modifications des profils de peptides antimicrobiens peuvent influencer la susceptibilité aux infections entériques et à l’inflammation de la muqueuse. Defa25 est donc pertinent pour des études mécanistiques de l’immunité intestinale, du dialogue épithélium–microbe et des programmes sécrétoires spécifiques de lignée au sein des cryptes intestinales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO cryptdin 25 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Defa25 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Defa25, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Defa25 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine cryptdin 25.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Defa25 pour l'étude de la signalisation de cryptdin 25, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Defa25 essentiels à la fonction de cryptdin 25
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Defa25 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le cryptdin 25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le cryptdin 25 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Defa25. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le cryptdin 25 plasmide HDR (m) et le cryptdin 25 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Defa25 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Defa25 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.