Plasmide Double Nickase (h) Cryopyrin/NALP3/NLRP3: sc-400270-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase (h) et le plasmide Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant NLRP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Antibody (6F12): sc-134306
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 | sc-400270-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cryopyrin/NALP3/NLRP3 | sc-400270-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le NLRP3 humain (cryopyrine/NALP3) est un récepteur cytosolique de reconnaissance des motifs (pattern-recognition receptor) qui nucléé l’inflammasome NLRP3 en réponse à divers signaux associés aux agents pathogènes et au danger, notamment les flux ioniques, le stress mitochondrial et les lésions lysosomales. Lorsqu’il est activé, NLRP3 s’assemble avec ASC et la pro-caspase-1 pour induire l’activation de la caspase-1, favorisant la maturation de l’IL-1β et de l’IL-18 et déclenchant une pyroptose dépendante de la gasdermine D. Cet axe de signalisation est central dans la régulation de l’immunité innée et relie le stress métabolique et inflammatoire à des programmes cytokiniques en aval. Une activité NLRP3 dérégulée et certaines variantes sont associées à des syndromes auto-inflammatoires et contribuent à des mécanismes inflammatoires étudiés dans des modèles de goutte, d’athérosclérose, de neuroinflammation et de maladies métaboliques.
Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NLRP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NLRP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NLRP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NLRP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.