Plásmido Doble Nickase (h) CRX: sc-401736-NIC

CRX (cone-rod homeobox) codifica un factor de transcripción con dominio homeobox específico de la retina que es esencial para la diferenciación y el mantenimiento de los fotorreceptores. En el núcleo, CRX coordina programas reguladores de la expresión génica que controlan componentes de la fototransducción, la biogénesis del segmento externo y la maduración sináptica, al unirse a elementos reguladores en cis y cooperar con otros factores de transcripción retinianos. Modula redes transcripcionales vinculadas a la señalización por cGMP, la expresión de opsinas y el soporte metabólico necesario para la función de conos y bastones. La alteración de la actividad o la expresión de CRX se asocia con fenotipos de degeneración retiniana hereditaria, lo que lo convierte en una diana clave para estudios mecanísticos del desarrollo de los fotorreceptores y de la regulación génica relevante para la enfermedad.

CRX El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.