Plasmide CRISPR/Cas9 KO CRTAP (h): sc-405828

Présentation

CRTAP (cartilage associated protein) code un composant résidant dans le réticulum endoplasmique du complexe de 3‑hydroxylation de la proline, lequel comprend également P3H1/LEPRE1 et la cyclophiline B (PPIB). Ce complexe coordonne les modifications post‑traductionnelles, le repliement et le contrôle qualité des collagènes fibrillaires, soutenant l’assemblage de la matrice extracellulaire et l’intégrité des tissus conjonctifs. La fonction de CRTAP relie la biosynthèse du collagène aux voies de maintien de l’homéostasie protéique dans le RE, notamment le repliement assisté par des chaperonnes et la surveillance de la protéostase. La perte d’activité de CRTAP est associée à des formes récessives d’ostéogenèse imparfaite et à des dysplasies squelettiques apparentées, caractérisées par une maturation défectueuse du collagène et une organisation altérée de la matrice.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CRTAP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CRTAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CRTAP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CRTAP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CRTAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CRTAP pour l'étude de la signalisation de CRTAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CRTAP essentiels à la fonction de CRTAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CRTAP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CRTAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CRTAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CRTAP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CRTAP plasmide HDR (h) et le CRTAP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CRTAP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CRTAP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.